在生物医疗领域，实验室中培养的细胞大致可以根据其类型分为三类：贴壁细胞、悬浮细胞和半贴壁细胞。

细胞类型分类

（1）贴壁细胞：此类细胞会粘附在培养容器上，例如组织培养塑料。

（2）悬浮细胞：所有细胞均在生长培养基中悬浮，不会附着在培养容器上。

（3）半贴壁细胞：部分细胞松散地附着在培养容器上，而另一些细胞则悬浮在培养基中。

增殖特性分类

根据细胞生长特性，细胞可以分为有限增殖和无限增殖：

• 有限增殖：这些细胞只会增殖到一定数量，例如从组织中直接分离的原代细胞，或经过一定次数传代后停止生长的细胞系。

• 无限增殖：这类细胞具备无限分裂的能力，通常是通过转化获得，呈现类似癌细胞的特性（如失去接触抑制以及无限增殖能力）。

冷冻保存

在细胞存储过程中，需要尽快将收到的细胞系进行冷冻，以确保遗传稳定性和降低污染风险。冷冻时使用含有冷冻保护剂（如DMSO）的液体，控制冷冻速度为理想的每分钟1°C，以防止细胞内部形成冰晶导致细胞活力丧失。

实验步骤

1. 使用显微镜观察细胞外观，确保无微生物污染并处于对数增长阶段，细胞活力应大于90%。
2. 收集并计数细胞，悬浮细胞应以2-5×10⁶个每毫升的密度冷冻，贴壁细胞应为1-2×10⁶个每毫升。
3. 选择合适的冷冻保护剂并准备所需冷冻液。
4. 使用200×g离心细胞悬液5分钟，去除上清液并重悬在PBS中。
5. 再次离心并去除上清液，用冷冻液重悬细胞沉淀，并转移到冻存管中，标记相关信息。
6. 将冻存管放入冻存盒，在-80°C下冻结一夜，然后转移至液氮罐进行长期贮存。

细胞复苏

在需要时，应尽快解冻细胞，以尽量减少对细胞活力的影响。在复苏过程中，建议通过离心去除冷冻保存剂。

实验步骤

1. 将冷冻管放入37°C水浴中，轻轻晃动促进解冻，解冻至约黄豆大小时取出。
2. 将1ml细胞转移至含有4ml预热培养基的离心管中，200-250×g离心5分钟。
3. 去除上清液，重悬细胞沉淀，再将其接种至合适的培养容器中。
4. 根据需要添加生长因子等成分。

细胞观察

应定期用显微镜和肉眼观察细胞，检查是否有微生物污染。同时，应使用显微镜检查细胞的健康状况，适时进行传代培养。

实验步骤

1. 用肉眼观察细胞培养状态以排除污染。
2. 在显微镜下检查细胞贴壁情况、细胞形态及融合度，并进行细胞密度监测。

细胞维持和传代培养

如果细胞生长健康且达到了所需的汇合度，则可进行传代培养。如细胞尚未达到要求的汇合度，应更换培养基，继续培养至达到标准。

更换培养基

1. 吸取旧的生长培养基。
2. 添加新鲜的生长培养基，并将培养容器放入培养箱，持续监测细胞状态。

传代培养

1. 清洗收集细胞并处理，确保细胞被适当清洗与重悬。
2. 选择适合的稀释比例，加入新鲜培养基并标注相关信息。
3. 按要求进行孵育，继续监测细胞的生长情况和污染迹象。

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