尊龙凯时在生物医疗领域的研究中，药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI）是导致严重不良反应甚至死亡的重要原因之一。为了科学评估DDI的发生可能性、严重性及其影响程度，对这一现象的深入研究显得尤为必要。

细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450）是体内关键的药物代谢酶，其介导的药物相互作用评估涵盖了代谢表型研究、酶诱导及酶抑制作用的评估。其中，药物对CYP450酶的抑制作用可分类为可逆性抑制（Reversible Inhibition）和时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）。与可逆性抑制相比，TDI可能带来更为严重的药物安全问题，因此，它受到药品监管机构和药物研发者的逐年重视。

CYP酶介导的时间依赖性抑制概述

CYP酶介导的酶抑制是指某些药物能够抑制特定的CYP450代谢酶活性，导致合用药物的代谢速度减缓、清除率降低和体内药物浓度增加，从而产生安全隐患。根据抑制机制的不同，药物对CYP450酶的抑制作用可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制。TDI通常指候选药物的代谢产物通过共价结合与酶形成复合物，使得酶不可逆失活，抑制效果并不会随着抑制剂的去除而立即消失，而是呈现时间依赖特性。

TDI的发生会引发药物暴露量的非线性增长和血药浓度显著升高，从而对患者健康造成严重威胁。抗高血压药物米贝拉地尔（mibefradil）就是TDI的经典案例，该药曾因导致其他药物血药浓度上升而引发严重不良反应，甚至导致死亡，最终退出市场。

由此可见，TDI不仅对患者构成风险，也对制药企业形成巨大的挑战。因此，监管机构以及药物研发者均对此高度关注。《药物相互作用研究技术指导原则（试行）》和ICH指导原则《M12：药物相互作用》均建议开展在研药物对多种CYP同工酶的可逆性抑制和时间依赖性抑制的体外试验评估。

时间依赖性抑制的体外试验评估

通常，采用人肝微粒体作为体外孵育系统对CYP450酶的时间依赖性抑制进行评估。目前，常用的TDI评估方法包括Single-point法、IC50位移法（IC50 shift）和Kinact/Ki法。

Single-point法

试验设计：采用一个或两个浓度（通常为1μM/10μM），结合一个探针底物浓度，进行±NADPH的预孵育，评估时间为一个点。

评价参数：相对剩余活性（%Remaining activity = (% of NC (+NADPH) / % of NC (-NADPH)) × 100），若相对剩余活性＜80%，提示可能存在TDI风险。

IC50位移法（IC50 shift）

试验设计：设置一系列浓度及探针底物浓度，进行±NADPH预孵育30分钟，评估得到的IC50值。该方法能进行更精确的DDI预测。

评价参数：IC50位移 = IC50（30min pre-incubation, -NADPH) / IC50（30min pre-incubation, +NADPH)。若IC50位移≥15，则提示在研药物存在TDI。

Kinact/Ki法

试验设计：涉及一系列浓度及探针底物的预孵育，±NADPH多个时间点，提供精准测定，可用于具体的DDI预测。

评价参数：Kinact/Ki结合临床药代动力学数据计算R²值，以评估其临床意义。

在所有方法中，IC50位移法因其便利性而被广泛使用。通过设置系列抑制剂浓度，并在加和不加NADPH的情况下进行预孵育，最终可以通过比较不同条件下的IC50值来评估药物的TDI。

IPHASE的时间依赖性抑制数据分析

作为体外研究生物试剂的领导者，尊龙凯时利用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4酶的时间依赖性抑制（TDI）作用。研究中预孵育时间设定为0min和30min，抑制剂浓度分别为0μM、0.00001μM、0.0001μM、0.01μM、0.1μM、1μM、10μM和100μM。

通过已知阳性底物睾酮被CYP3A4转化为特异性代谢产物6β-羟基睾酮，并利用液相-串联质谱（LC-MS/MS）检测生成量，以计算IC50值并进行数据分析。

结论与展望

尊龙凯时致力于为创新药研发提供高品质的生物试剂，支持CYP酶介导的时间依赖性抑制等多方面的研究。通过其在肝微粒体产品的多样化，助力广大科研工作者探索药物相互作用的复杂性，进一步推动医药领域的创新与发展。